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DNA提取的原理?

  • DNA提取的原理?
  • 2024-03-28 16:27:56
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简介原理:1.析出溶解在NaC1溶液中的DNA。2.用冷酒精提取出含杂质较少的DNA。3.DNA在沸水浴时被二苯胺染成蓝色。方法步骤:1.提取细胞核物质:顺时针方向搅拌,稍快,稍重。 5 min2.溶解D...

原理:

DNA提取的原理?

1.析出溶解在NaC1溶液中的原理DNA。

2.用冷酒精提取出含杂质较少的原理DNA。

3.DNA在沸水浴时被二苯胺染成蓝色。原理

方法步骤:

1.提取细胞核物质:顺时针方向搅拌,原理稍快,原理稍重。原理 5 min

2.溶解DNA:

3.析出含DNA的原理黏稠物:蒸馏水300mL,逆时针方向搅拌,原理缓慢

4.过滤:取黏稠物

5.再溶解:顺时针方向搅拌,原理较慢。原理3 min

6.过滤:取滤液。原理

7.提取出含杂质较少的原理DNA,逆时针方向搅拌,原理稍慢。原理5 min

8.DNA的原理鉴定:沸水浴5min

大学:

DNA提取分为三个基本步骤,每个步骤的具体方法可根据样品种类、影响提取的物质以及后续步骤的不同而有区别。

利用研磨或者超声破碎细胞,并通过加入去污剂以除掉膜脂。

加入蛋白酶,醋酸盐沉淀,或者酚/氯仿抽提,以除掉细胞内的蛋白,如与DNA结合的组蛋白。

将DNA在冷乙醇或异丙醇中沉淀,因为DNA在醇中不可溶而黏在一起,这一步也能除掉盐分。

另外,目前也有利用吸附过柱的方法提取DNA的商业化试剂盒。

2.细胞的破碎

细菌有坚硬的细胞壁,首先要破碎经胞。方法有三种;①机械方法:超声波处理法、研磨法、匀浆法;②化学试剂法:用SDS处理细胞;③酶解法:加入溶菌酶或蜗牛酶,都可使细胞壁破碎。

3.DNA提取的几种方法

(1).浓盐法

A. 利用RNA和DNA在电解溶液中溶解度不同,将二者分离,常用的方法是用1M 氯 纳提取化钠抽提,得到的DNP粘液与含有少量辛醇的 氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间,而DNA位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来.

B. 也可用0.15 MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按氯仿---异醇法除去蛋白.

两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些.

C.以稀盐酸溶液提取DNA 时,加入适量去污剂,如SDS可有助于蛋白质与DNA 的分离。在提取过程中为抑制组织中的DNase对DNA 的降解作用,在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂.通常用.15MNaCL,0.015M柠檬钠,并称SSC溶液,提取DNA. (2).阴离子去污剂法; 用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取DNA .由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取DNA

(3).苯酚抽提法:苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相,而DNA溶于水相。离心分层后取出水层,多次重复操作,再合并含DNA 的水相,利用核酸不溶于醇的性质,用乙醇沉淀DNA 。此时DNA是十分粘稠的物质,可用玻璃漫漫绕成一团,取出。此法的特点是使提取的DNA保持天然状态

(4).水抽提法:利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去RNA,然后将沉淀溶于水中,使DNA充分溶解于水中,离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M.加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出.然后分别用66% ,80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,既得DNA样品.此法提取的DNA中蛋白质含量较高,故一般不用.为除蛋白可将此法加以改良,在提取过程中加入SDS.

结果就是得到DNA

为什么科学家可以从几十万年前的人类遗骨中提取DNA?

提取DNA需要在碱性条件下的原因如下:

在酸性条件下,DNA容易被水解,但最不稳定是的嘌呤与脱氧核糖之间的糖苷键.在碱性条件下,RNA由于2'-OH的存在,比DNA要容易水解得多,DNA在碱性条件下相对稳定.

DNA提取方法:

酚抽提法:先用蛋酶K、SDS破碎细胞,消化蛋白,然后用酚和酚-氯DNA大小为100-150kb

甲酰胺解聚法:破碎细胞同上,然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合,再透析获得DNA可得DNA200kb左右。

玻璃棒缠绕法:用盐酸胍裂解细胞,将裂解物铺于乙醇上,然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅,DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。

异丙醇沉淀法:基本同1法,仅用二倍容积异丙醇替代乙醇,可去除小分子RNA(在异丙醇中可溶状态)

表面活性剂快速制备法:用Triton X-100A或NP40表面活性剂破碎细胞,然后用蛋白酶K或酚去除蛋白,乙醇沉淀或透析。

加热法快速制备:加热96℃-100℃,五分钟,然后离心后取上清,可用于PCR反应。

碱变性快速制备:先用NaOH作用20分钟,再加HCI中和,离心后取上清,含少量DNA。

细胞中病毒dna的提取是基于什么原理

众所周知,DNA是遗传信息的载体,通过对古代人类化石中DNA的提取可以有效地研究人类的演化和迁徙过程,是现代考古学中至关重要的一环。然而,很多读者经常会产生疑问,距离现在几十万前的人类化石为何仍然存在可以被提取的DNA?科学家又是如何从化石中提取出DNA的呢??

当人死亡之后,身体的生理机能全部停止,细胞中的酶会开始分解DNA主链的组成物质——核苷酸之间的连接,而环境中的微生物的存在也会加快分解的速度。不过,连接分解最主要的影响因素是水分。由于人体掩埋的土壤环境中,水分几乎无处不在,因此埋在地下的骨骼中的DNA会以一个特定的速度衰解。

那么DNA的衰变周期是多长呢?哥本哈根大学的研究人员通过对158块含有DNA的腿骨进行检测之后,确定DNA的半衰期为521年。换句话说,在人体死亡的521年之后,骨骼中一半的“核苷酸连接”会被破坏;再过521年,剩下一半中的一半又会被断掉;以此类推,直到全部断掉为止。?

在最理想的状态下,如果人体的骨骼可以保存在负五摄氏度的温度下,骨骼中的DNA直到680万年之后,才会被全部破坏掉。但在真实的环境中,不同的温度和水分,微生物的破坏以及其它不可控因素的影响,骨骼中DNA序列在经过大约150万年以后就已经很难被提取出来。即使某些片段被提取,也会因为含有的遗传信息太少而不具参考价值。?

目前,最常用的方法是二氧化硅萃取法,该方法是基于DNA分子在二氧化硅上的吸附作用。通过在化石中取出少量的骨粉,然后溶解在含有二氧化硅的特定溶剂中进行离心,骨粉中的DNA就会被吸附在二氧化硅上。

二氧化硅萃取法具有快速简便、可扩展、 易于实施等优点,但缺点是对于不同的样品,需要使用不同的添加剂。比如,当提取的对象是骨骼和牙齿时,需要在萃取溶液中加入大量的EDTA(乙二胺四乙酸),它可以溶解骨和牙齿样品种特有的羟基磷灰石基质;而对于粪便等样品,则需要添加PTB,它会与DNA交联从何提取DNA。

博凌科为

细胞/组织基因组dna提取试剂盒(离心柱型)洗脱纯净基因组dna的工作原理及步骤:

独特的结合液/蛋白酶k迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶,

然后基因组dna在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,

再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质去除,

最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组dna从硅基质膜上洗脱。

试剂盒特点及优势:

离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。

不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。

快速,简捷,单个样品操作一般可在30分钟内完成。

多次柱漂洗确保高纯度,纯度达1.7~1.9,长度可达30kb-50kb,可直接用于pcr,southern-blot和各种酶切反应。

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